Page 17 - tmp

Identifikacija ćelijskih tipova nastalih diferencijacijom NT2/D1 ćelija pod dejstvom

retinoične kiseline

Tijana Stanić

Regionalni centar za talente Beograd II, Srbija, tijana.stanic.22@gmail.com

1.Uvod

Ćelije poreklom od embrionalnih karcinoma imaju svojstva
matičnih ćelija koje mogu da se, pod određenim uslovima,
diferenciraju u različite tipove ćelija. NT2/D1 je ćelijska
linija poreklom od embrionalnog teratokarcinoma testisa
koja pokazuje sličnost sa ranim neuroepitelijalnim
progenitorima. Pod dejstvom retinoične kiseline ove ćelije
se diferenciraju u neurone i ćelije glije. Cilj ovog rada bio
je da se metodom imunocitohemije ispita morfologija i Slika 1 – netretirane Slika 2 – NT2/D1 neuroni posle
identitet ćelija dobijenih u procesu diferencijacije NT2/D1 NT2/D1, alpha-tubulin i 6 nedelja tretmana retinoičnom
ćelija. DAPI na fluorescentnoj kiselinom, alpha-tubulin na
mikrografiji fluorescentnoj mikrografiji

2. Metoda rada
4. Zaključak
NT2 ćelije su gajene u standardnim uslovima u prisustvu 10
µM all-trans retinoične kiseline. Nakon četiri nedelje NT2/D1 ćelijska linija predstavlja značajan model sistem za
diferencijacije, radi dalje analize, višeslojni ćelijski agregati proučavanje neurogeneze kod čoveka i ekspresije gena
su tripsinizovani, nakon čega je izvršena subkultivacija. uključenih u proces neuralne diferencijacije. Metodom
Ćelije su zasađene na staklene pokrovne ljuspice a zatim imunocitohemije utvrdili smo morfologiju i identitet
fiksirane 4% paraformaldehidom. Morfologija ćelija je diferenciranih ćelija, dok će krupne ćelije, negativne na
analizirana metodom imunocitohemije u prisustvu oba markera diferenciranih neuralnih ćelija, biti predmet
citoskeletnog markera alpha-tubulina dok su neuronalni i daljih istraživanja.
glijalni tipovi ćelija identifikovani u prisustvu specifičnih
markera MAP2 (za neurone) i GFAP (za glijalne ćelije).
Oblik i veličina ćelija su analizirani i dokumentovani na 5. Literatura
fazno-kontrastnom i fluorescentnom mikroskopu.
[1] B.D.Stefanović,V.Đorđević-Čamba,Z.Kojić,M.Bajčetić,
M.Ćetković, Integrativna neurobiologija, Mikro knjiga i
3. Rezultati istraživanja B&M, Beograd, 2003.
[2] S.J.Pleasure, C.Page, V.M.-Y.Lee, Pure, Postmitotic,
Na početku tretmana, NT2/D1 ćelije su uočene kao tamne, Polarized Human Neurons Derived from NTera 2 Cells
nediferencirane ćelije granularnog oblika, sa malo Provide a System for Expressing Exogenous Proteins in
citoplazme oko krupnog jedra. Fluorescentnom Terminally Differentiated Neurons, The Journal of
mikroskopijom u prisustvu antitela na alpha-tubulin Neuroscience, 1992.
detektovana je citoplazma nediferenciranih ćelija. Nakon [3] G.Podrygajlo, M.A.Tegenge, A.Gierse, F.Paquet-
četvoronedeljnog tretmana, formirana je višeslojna Durand, S.Tan, G.Bicker, M.Stern, Cellular phenotypes of
struktura gusto sabijenih ćelija. Na ovom stupnju uočene su human model neurons (NT2) after differentiation in
svetle ćelije nalik neuronima, sa izraštajima sličnim aggregate culture, Cell Tissue Res 336-439-452, 2009.
aksonima, koje u grupama rastu na krupnim neneuronalnim [4] Peter W. Andrews, Department of Biomedical Science,
ćelijama. U prisustvu antitela na MAP2 protein ove ćelije Western Bank, Unievrsity of Sheffield, From
su identifikovane kao neuroni. Istovremeno, u malom broju, teratocarcinomas to embryonic stem cells, Phil. Trans. R.
detektovane su i glijalne ćelije u prisustvu antitela na GFAP Soc. Lond. B, 2002.
protein. Takođe, antitelo na alpha-tubulin omogućilo je da
se identifikuje i treća grupa ćelija čiji je identitet ostao
nepoznat, jer ove ćelije nisu pokazivale imunoreaktivnost
na markere diferenciranih neuralnih ćelija.