Page 33 - tmp

Detekcija genske varijante rs2228570 receptora za vitamin D kod pacijenata
obolelih od sistemske skleroze

Olgica Maksimović - Regionalni centar za talente Beograd II

Uvod Detekcija polimorfizma u egzonu 2 gena VDR vršena je
metodom PCR-RFLP. Enzim FokI specifično prepoznaje
GGATG sekvencu. Očekivana dužina produkta digestije za
Sistemska skleroza je hronična autoimuna bolest koju
karakteriše oštećenje malih krvnih sudova kože (1). Važna alel F je 266bp; 193bp i 73bp za alel f, odnosno 266bp, 193bp
uloga vitamina D je u imunskom sistemu gde svoju i 73bp za heterozigotnu kombinaciju Ff za ovaj SNP.
imunoregulatornu ulogu ostvaruje putem vezivanja za svoj Produkti digestije vizuelizovani su elektroforezom na
receptor VDR (vitamin D receptor) (2,3). Genska varijanta agaroznom gelu koncentracije 2%. Na gelu se osim produkata
T>C u oviru SNPrs2228570 u VDR genu (FokI polimorfizam) digestije nalazi PCR produkt koji nije isečen restrikcionim
utiče na strukturu VDR proteina i značajna je za njegovu enzimom, i DNK marker dužine 100bp (Slika 2).
aktivnost.
Zaključak
Materijali i metode
Metoda PCR-RFLP primenjena je za datekciju genske
varijante T >C u oviru SNPrs2228570 gena za VDR. Dobijeni
U ispitivanje je uključeno 10 bolesnika obolelih od sistemske
skleroze. Za detekciju FokI polimorfizma orišćena je metoda rezultati potvrđuju da se ova metoda može koristiti za analizu
PCR-RFLP. Uzorci DNK umnoženi su PCR metodom. PCR ove genske varijante. Ispitivanje na uzorku od 10 pacijenata
produkti tretirani su restrikcionim enzimom FokI. Princip utvrđeno je prisustvo sve tri varijante: FF, Ff, i ff.
metode je da u zavisnosti od prisutnosti restrikcionih mesta Ispitivanjem cele grupe ispitanika i poređenjem uzoraka
dobijamo DNK fragmente različite dužine. Produkti reakcije pacijenata sa kontrolnom grupom zdravih ispitanika utvrdiće
restrikcione digestije analizirani su agaroznom gel se da li je ova genska varijanta povezana sa nastankom
elektroforezom. sistemske skleroze u našoj populaciji.

Rezultati i diskusija Literatura

1. Clements P.J. Furst D.E Sysytemic sclerosis,
Baltimore, Wiliams and Wilkins 1996.
2. Expression of 1,25-Dihydroxyvitamin D 3 Receptors
in Normal and Psoriatic Skin. Journal of Investigative
Dermatology (1991) 97, 230–239; doi:10.1111/1523-
Slika 1. Provera PCR amplifikacije elektroforezom na 2% 1747.ep12480255
agaroznom gelu. Elektroforetogram PCR produkata 10 ispitanika 3. Mounting Evidence for Vitamin D as an
očekivane dužine od 266 bp. Pozicija 1-DNK marker dužine 100 bp. Environmental Factor Affecting Autoimmune
Pozicija 2,3,4,6,7, 8, 9, 10, 11-PCR produkti Disease Prevalence mpact Factor:2.226
| Ranking:Medicine, Research & Experimental 61 out
of 122 | 5-Year Impact Factor:3.023 | 5-Year
Ranking:Medicine, Research & Experimental 40 out
of 122

Slika 2. Elektroforetogram PCR-RFLP analize SNP rs2228570
gena VDR. Pozicija 1- DNK marker od 100bp; pozicija 2, 4, 5, 7, 10
- uzorci sa genotipom Ff; 3, 8, 9-uzorci sa FF genotipom;6- uzorak
sa genotipom ff; 11-PCR produkt koji nije tretiran restrikcionim
enzimom.